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污水中新型冠状病毒富集新选择

2023-03-16 13:59浏览量:50

近期,美正生物推出智能水体微生物采集系统,并与行业标准WS/T799-2022《污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测方法标准》进行了实验过程和实验结果的比较。聚乙二醇沉淀法、铝盐混凝沉淀法富集浓缩实验,按照标准WS/T799-2022中试剂材料、操作步骤执行。美正生物智能水体微生物采集系统(以下简称“美正超滤法”)按照说明书执行。


材料与方法


材料:

智能水体微生物采集仪、高速冷冻离心机、生物安全柜、超滤浓缩管(0.01μm)、过滤袋、移液器及吸头、超滤浓缩管洗液、MS2过程控制试剂盒(RT-PCR探针法-50°C)。


方法:

预处理:取不同浑浊程度的污水样本,添加MS2混匀。样本进行4℃、5000g、30min或倒入过滤袋进行预处理,两方法均保留上清液,待用。


浓缩富集:

聚乙二醇沉淀法和铝盐混凝沉淀法按照标准WS/T799-2022进行富集浓缩,得到水样浓缩液,于0-4℃条件下保存,并于24h内进行核酸提取和荧光定量检测。


美正超滤法使用智能水体微生物采集系统用超滤浓缩管进行富集,富集后使用4mL超滤浓缩管洗液进行洗脱,得到水样浓缩液,于0-4℃条件下保存,并于24h内进行核酸提取和荧光定量检测。


实验过程


实验过程.png


聚乙二醇沉淀法的实验步骤为预离心-二次离心-富集浓缩,需要使用高速冷冻离心机等昂贵设备,且多次离心、操作繁琐,样本处理时间为3.5-4h。铝盐混凝沉淀法的实验步骤为预离心-富集浓缩,实验准备时需要配置多种试剂,需要络合溶解,样本处理时间为2h。


美正超滤法实验步骤为预处理-浓缩-洗脱。高速离心、预处理2种方法均可满足前处理,且无需使用及配置大量试剂,样本处理时间为3-5min/100mL。综上,从操作便捷性及所需时间来看,美正超滤法显著优于聚乙二醇沉淀法、铝盐混凝沉淀法。


实验结果


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✦注:数据来源于实验室,实际情况可能因样本或操作等情况导致不同。


聚乙二醇沉淀法取3份35mL污水样本,低浑浊回收率为5%±4%。铝盐混凝沉淀法取100mL样本污水样本,低浑浊回收率为16%±8%。美正方法取100mL样本污水样本,低浑浊回收率为70%±15%。


从表中可以看出,污水样本越浑浊,回收率越低,其中聚乙二醇沉淀法高浑浊污水样本回收率为ND。美正超滤法回收率显著优于聚乙二醇、铝盐混凝沉淀法。美正超滤法也可增大采样体积,进而提高检出率。


讨论


美正智能水体微生物采集系统可满足污水中新型冠状病毒富集浓缩。美正智能水体微生物采集仪可满足大体积样本的浓缩需求,随样本量体积的增加,可提高病毒阳性率的检出率。同时富集得到的病毒浓度大,更利于测序后续检测。


不同病毒富集方法回收率样本间差异大。可通过添加外源性内参,如噬菌体MS2、牛冠状病毒疫苗、灭活鼠肝炎病毒等,来评估病毒富集回收率。


部分浑浊度较高的污水样本提取后对反应体系有抑制,可能干扰PCR反应。建议同时对原液样本、10-1稀释样本进行检测,根据实验室试验结果,10倍稀释样本可有效减少抑制干扰。对于回收率的计算方法,建议参照GB4789.42诺如病毒检验中外加扩增控制,进行计算。



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